Pruebas serológicas para el virus del dengue

Ensayo de inmunoadsorción enzimática para la detección de anticuerpos IgM (MAC-ELISA)

¿Qué es la prueba?

• La prueba MAC-ELISA del dengue se utiliza para la detección cualitativa de anticuerpos IgM contra el virus del dengue.
• La prueba MAC-ELISA se basa en la captura de anticuerpos IgM humanos en una placa de microtitulación utilizando anticuerpos anti-IgM humanos, seguido de la adición de antígenos del virus del dengue. Los antígenos utilizados para este ensayo se derivan de las proteínas de la envoltura de los cuatro serotipos del virus del dengue (DENV-1-4).

¿Cómo se debe utilizar y en qué momento durante la infección?

• A medida que el sistema inmunitario combate la infección, los anticuerpos IgM contra el virus del dengue se pueden detectar entre 4 y 5 días después del inicio de los síntomas y se pueden detectar de manera confiable durante aproximadamente 12 semanas.
• Las pruebas combinadas de amplificación de ácidos nucleicos (NAAT) y MAC-ELISA suelen proporcionar un resultado diagnóstico durante los primeros 1 a 7 días de la enfermedad. Se necesita una muestra de la fase de recuperación para realizar un diagnóstico de infección por el virus del dengue cuando los resultados de ambas pruebas de la muestra de la fase febril son negativos.
• La detección de anticuerpos IgM no es útil para la determinación del serotipo del virus del dengue.

Tipos de muestras

• Suero
• Líquido cefalorraquídeo (LCR)

Interpretación de resultados

• IgM positivo: los pacientes con un resultado positivo en la prueba de IgM en una sola muestra se clasifican como infecciones presuntamente recientes por el virus del dengue.
• IgM negativo:
  • Los pacientes con un resultado negativo de IgM entre los días 0 y 7 de la enfermedad y con resultados negativos o ausentes de NAAT o NS1 se consideran casos no confirmados. En estos casos, se debe obtener una segunda muestra después del día 7 de síntomas para realizar pruebas serológicas adicionales.
  • Los pacientes con resultados de IgM negativos después de 7 días de síntomas y NAAT o NS1 (detección de antígeno del virus del dengue) ausentes o negativos, se clasifican como negativos para infección reciente.
  • Los pacientes con un cambio de resultados de IgM negativos a positivos en muestras pareadas (primera muestra recolectada durante los primeros 7 días de enfermedad y segunda muestra recolectada después de que los síntomas desaparezcan) se clasifican como infecciones actuales de dengue.
• Seroconversión:
  • La seroconversión se observa cuando se analizan una muestra de la fase febril (generalmente obtenida durante el primer día de la enfermedad) y una muestra de la fase de recuperación (obtenida después de 7 días) para detectar IgM. Si los resultados de la prueba cambian de negativos a positivos, se diagnostica al paciente con dengue actual. Los resultados negativos en ambas muestras son una indicación sólida de que el paciente no estaba infectado con el virus del dengue.
  • La seroconversión de IgG también puede utilizarse para diagnosticar el dengue. Sin embargo, no se recomienda realizar pruebas de IgG en una sola muestra. La presencia de estos anticuerpos puede indicar una infección previa por el virus del dengue.
• Reactividad cruzada de las pruebas serológicas del dengue:
  • Debido a la reacción cruzada con otros flavivirus y a la posible reactividad inespecífica, los resultados de IgM e IgG pueden ser difíciles de interpretar. En consecuencia, los resultados de la prueba de anticuerpos IgM presuntamente positivos, indeterminados y equívocos pueden enviarse para confirmación mediante la prueba de neutralización por reducción de placas (PRNT). Véase a continuación.

Disponibilidad

Las pruebas serológicas de IgM para el dengue están disponibles como pruebas desarrolladas en laboratorios clínicos comerciales y de salud pública. Solo hay un kit de detección de IgM para el dengue aprobado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los EE. UU. disponible comercialmente. Las pruebas de IgG están disponibles en algunos laboratorios clínicos. Los CDC no recomiendan realizar pruebas de IgG en una sola muestra para el diagnóstico de infecciones por dengue en la fase febril.

Prueba de IgG

• No se recomienda la prueba serológica mediante ELISA de IgG en una sola muestra para el diagnóstico de dengue en la fase febril en pacientes.
• Estas pruebas pueden detectar anticuerpos de infecciones por dengue u otras infecciones por flavivirus que ocurrieron en el pasado.

Prueba de neutralización por reducción de placas (PRNT) y pruebas de microneutralización

¿Qué son estas pruebas?

• La PRNT es un ensayo biológico basado en las interacciones entre el virus y los anticuerpos. Produce la inactivación del virus, de modo que este ya no puede infectar ni replicarse en cultivos celulares.
• La PRNT puede detectar y medir el título de anticuerpos neutralizantes específicos contra el virus del dengue y otros flavivirus del suero de un paciente infectado.
• La PRNT se utiliza para determinar con mayor precisión la causa de la infección en pacientes IgM positivos para quienes un diagnóstico específico es clínica o epidemiológicamente importante (por ejemplo, para descartar otros flavivirus como el Zika o la fiebre amarilla).
• La PRNT es una prueba que requiere mucho trabajo y es relativamente costosa.
• Un único resultado de la prueba PRNT no puede ayudar a determinar el momento de la infección. Los resultados de la prueba PRNT de muestras pareadas de casos en la fase febril y de recuperación se pueden utilizar para confirmar una infección reciente.
• El ensayo de microneutralización se basa en el mismo principio que el de la PRNT.
  • El ensayo utiliza una medición colorimétrica o fluorométrica del número de células infectadas.
  • Este ensayo fue desarrollado para utilizar menos reactivos y para probar un mayor número de muestras.

¿Cómo se deben utilizar las pruebas PRNT y de microneutralización?

• Las pruebas de PRNT y de microneutralización se pueden utilizar cuando se requiere un diagnóstico serológico específico para descartar el virus del Zika u otros flavivirus de interés, por ejemplo, en mujeres embarazadas o en casos de importancia clínica y epidemiológica.
• Estas pruebas se utilizan para confirmar el virus infeccioso en una muestra con resultado positivo de IgM para el virus del dengue o del Zika. En algunos casos, pueden determinar el serotipo del virus del dengue causante de la infección.
• Para los residentes que viven en áreas con circulación del virus del dengue y del Zika, o para viajeros con múltiples exposiciones a largo plazo, las pruebas PRNT y de microneutralización pueden tener menos utilidad para diferenciar las infecciones por flavivirus.
• Los médicos deben comunicarse con los departamentos de salud locales para conocer la utilidad y disponibilidad de la prueba PRNT como prueba confirmatoria para casos positivos de IgM.

Tipo de muestras

• Suero
• LCR

Interpretación de resultados

• La prueba PRNT realizada en una muestra positiva para IgM del dengue que muestre anticuerpos neutralizantes contra un solo serotipo del virus del dengue confirmará una infección reciente con ese serotipo.
• Una seroconversión de un PRNT negativo en una muestra de la fase febril a un PRNT positivo con anticuerpos contra un solo serotipo del virus del dengue en una muestra de la fase de recuperación confirmará una infección reciente con ese serotipo.
• Una indicación de una infección reciente por flavivirus es un aumento de cuatro veces en los títulos de PRNT en muestras pareadas de pacientes en la fase febril y de recuperación con anticuerpos contra múltiples serotipos del virus del dengue u otros flavivirus en la muestra de la fase de recuperación.
• La prueba PRNT realizada en una sola muestra positiva para IgM del dengue puede mostrar títulos de anticuerpos neutralizantes para el dengue, el zika y otros flavivirus incluidos en la prueba. Estos resultados se clasifican como una infección reciente por flavivirus.
• Los casos podrían reclasificarse como otro flavivirus, como el Zika, según los resultados de la PRNT.
• Un resultado negativo de PRNT o de microneutralización en una muestra positiva de IgM para dengue durante una enfermedad en la fase febril puede indicar que no hay actividad neutralizante detectable. Un resultado positivo de IgM sigue siendo presuntivo en ausencia de otros resultados de pruebas confirmatorias (PRNT, pruebas de microneutralización, NS1 o NAAT).

Disponibilidad

Las pruebas de PRNT y microneutralización se realizan en los CDC o en un laboratorio designado por los CDC (es decir, un laboratorio que ha demostrado de forma independiente su competencia para realizar pruebas PRNT completando un panel de competencia proporcionado por los CDC).

Los laboratorios de salud pública pueden remitir muestras con resultados positivos de anticuerpos IgM a los CDC para que se realicen pruebas PRNT a fin de confirmar resultados positivos, equívocos o no concluyentes de IgM. En algunos países con recursos limitados, es posible que no estén disponibles las pruebas PRNT y de microneutralización.